Qubit檢測中遇到的問題查缺補漏

您在Qubit檢測中遇到了除“標準品錯誤"以外的其它試劑盒相關(guan) 問題。

這裏有一些建議，不知對您是否有幫助，一起看看吧
1.在“查看標準品"或"查看校準"下查看標準品的原始熒光值（RFU）。確認樣本的熒光值落在標準品的熒光值之間（或稍稍高於(yu) 最高的標準品）。如果不是，那麽(me) 樣本已經超過了檢測的精確範圍。請參看產(chan) 品目錄中的各個(ge) 檢測試劑盒的置信區間。如果檢測樣本超過了置信區間，那麽(me) 檢測讀數將是2位有效數字而不是3位。 要使樣本進入準確測定範圍，可稀釋樣本或使用更多或更少體(ti) 積的樣本（例如，如果樣本讀值較低的話，使用10 µL而非2 µL）。
2.檢查溫度因素。檢測是溫度敏感性的，熒光信號在較高溫度時會(hui) 減弱。樣本之間或樣本和標準品之間的溫度波動可能引發問題。
確保緩衝(chong) 液和保存在DMSO內(nei) 的Qubit試劑處於(yu) 室溫。緩衝(chong) 液和Qubit試劑應保存於(yu) 室溫，而不是冰箱內(nei) 。保存於(yu) 4°C的緩衝(chong) 液即使在室溫放置2–3小時仍然不能達到室溫。
確保你的樣本和工作溶液不能過熱（包括剛從(cong) 離心機取出時）。保留在Qubit儀(yi) 器內(nei) 過久或多次讀取的樣本可能會(hui) 升溫。如果你想對一個(ge) 試管多次讀數，你應該將它從(cong) 儀(yi) 器內(nei) 取出，放置30秒以平衡至室溫，然後進行下一次讀數。另外，在讀數之前，不要將試管握在手中過長時間，因為(wei) 這會(hui) 加熱樣本，使讀數變低。
3.確保正確製備Qubit工作溶液（使用試劑盒內(nei) 的緩衝(chong) 液1:200稀釋）。確保正確製備標準品（10 µL標準品加入到190 µL工作溶液中）。確保試管中加入至少200µL液體(ti) （對於(yu) 標準品和樣本均是如此）。
4.確保你使用的試劑和標準品是6個(ge) 月之內(nei) 的，並且標準品保存方法正確。Qubit試劑存儲(chu) 溶液應盡可能避光保存。
5.確保在Qubit熒光計上選擇的程序跟你所用的Qubit檢測試劑盒是匹配的。
6.讀取標準品和樣本數值時，確保儀(yi) 器的蓋子關(guan) 閉。
7.使用推薦的檢測管（檢測管不能阻擋儀(yi) 器蓋上蓋子，並且檢測管應當光學透明）。某些類型的檢測管可能有較高的自發熒光而影響檢測。
8.你在Qubit儀(yi) 器中輸入你所加入到工作溶液中的存儲(chu) 液的微升數了嗎？如果輸入了，那麽(me) Qubit熒光計獲得此信息後給出的濃度是你的存儲(chu) 液的濃度。如果沒有輸入，那麽(me) 你得到的濃度是檢測試管（你放入Qubit熒光計的試管）內(nei) 的濃度——不是你的存儲(chu) 液濃度。
9.如果你是將Qubit檢測的結果和使用UV吸光值獲得的濃度進行比較，並且基於(yu) UV吸光值的濃度顯著較高，那麽(me) 可能是因為(wei) 核酸或蛋白汙染。Qubit檢測試劑對於(yu) DNA, RNA和蛋白的檢測特異性比吸光值測定法高得多。